全血PCR增强液

产品货号：

YTB4065

中文名称：

全血PCR增强液

英文名称：

2×Blood PCR Enhancer

产品规格：

20μL×200T|20μL×1000T

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

本制品是一种使用百奥莱博的BloodTaq DNA Polymerase (Blood-resistant，货号：YTB4081)或BloodTaq HF DNA Polymerase (Blood-resistant，货号：YTB4082)时，克服因模板高GC含量所导致的PCR扩增障碍的PCR增强剂。高GC含量DNA片段的扩增一直是分子生物学操作过程中的一个难点，本产品可用于含有肝素、柠檬酸钠以及EDTA等抗凝血的直接PCR反应，从而大大提高了高GC含量DNA模板的扩增效率及扩增的特异性。本产品也可以用于普通PCR时扩增高GC含量的目的片段。

2×Blood PCR Enhancer可以适用于商业化的常见的多种耐血DNA聚合酶，如百奥莱博的BloodTaq DNA Polymerase (Blood-resistant，货号：YTB4081)和BloodTaq HF DNA Polymerase (Blood-resistant，货号：YTB4082)，NEB的Hemo KlenTaq等。
本产品直接扩增EDTA抗凝血中高GC含量基因的效果参考图1。
全血PCR增强液

图1.使用2×Blood PCR Enhancer扩增高GC含量目的基因的电泳效果图。图A中可见，HRES1基因488bp片段(GC含量81%)和DIP2A基因1185bp片段(GC含量71%)，在添加2×Blood PCR Enhancer后可以扩增出单一的非常明亮的特异性条带，但不添加时就不能扩增获得特异性的目的条带。图B中可见，扩增HRES1基因488bp片段(GC含量81%)时，使用百奥莱博的本产品能扩增出单一的条带，而使用公司A和B的类似产品主带比较微弱并且杂带很多，使用常见的最终浓度为1.3M的甜菜碱(Betaine)的扩增高GC含量的该片段时效果也欠佳。

产品组成

组分	20μL×200T	20μL×1000T
2×Blood PCR Enhancer	2mL	5×2mL
说明书	1份	1份

保存：-20℃

在使用本产品2×Blood PCR Enhancer的同时，必须同时使用和耐血DNA聚合酶配套的最终浓度为1×的PCR Buffer。
本产品溶解时如果有结晶状沉淀物，可以在50℃水浴温育片刻促进溶解，并确保完全溶解后使用。
请尽量使用新近采集的抗凝血样本进行检测；如果是冻存的样本，尽量避免反复冻融，以免在冻融过程中导致目的基因的断裂和降解。
设置PCR反应体系时，抗凝血的推荐用量为PCR体系总体积的5～10%左右，可以直接添加到PCR体系中，无需进行任何额外处理。
PCR反应结束之后，建议3000～5000g离心3～5min以沉淀血细胞碎片，便于吸取上清用于电泳分析等。
注意：由于抗凝血本身的原因，PCR结束后在PCR管底部会出现透明凝胶状物质，此为正常现象。
由于PCR反应非常灵敏，可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在操作时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

PCR反应参数的设置请参照特定的耐血DNA聚合酶的说明书进行。通常对于扩增高GC含量的DNA模板，延伸时间可以比常规的延伸时间适当延长一些。

PCR反应体系的设置可以参考特定的耐血DNA聚合酶进行，仅仅添加反应总体积一半的本试剂盒所提供的2×Blood PCR Enhancer即可。可以参考如下反应体系设置PCR反应：

融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。将BloodTaq DNA Polymerase置于冰浴上或冰盒内。

参考下表在冰浴上设置PCR反应体系(如果有多个类似的PCR反应，可以先配制大体积的包含水、buffer、dNTP和BloodTaq酶的混合物，然后分装到各PCR反应管内。根据情况，有时混合物中也可以包括引物)：

试剂	20μL体系	50μL体系	终浓度
Nuclease-Free Water	(4-x)μL	(10-y)μL	-
10X BloodTaq PCR Buffer	2μL	5μL	1X
2×Blood PCR Enhancer	10μL	25μL	1X
dNTP (2.5mM each)	2μL	5μL	0.25mM each
引物混合物(10μM each)	1μL	2.5μL	0.5μM each
BloodTaq DNA Polymerase	1μL	2.5μL	-
抗凝全血	xμL	yμL	-
总体积	20μL	50μL

注意：
① 模板使用量：
作为PCR模板的抗凝血用量一般为PCR反应体系总体积的1～20%，建议起始使用量为5%。如果PCR反应用于检测基因组的DNA片段，可以适当减少抗凝血用量；如果用于检测血液样品中某种病毒或细菌等微生物的目的DNA片段，建议使用50μL的PCR体系，并使用较大的模板血量。对于高GC含量的PCR扩增，可以使用扩增高GC含量DNA片段的2×Blood PCR Enhancer，或者尝试向PCR体系中加入终浓度1～10% (体积百分比)的DMSO。
② 引物浓度：
通常引物的终浓度为0.5μM时可获得良好的检测效果，也可以根据情况在0.1～1.0μM范围内调整引物的终浓度。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度。

用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。
如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油(货号：YT399)。
把设置好的PCR反应体系置于PCR仪上，开始PCR反应。PCR反应参数的设置可以参考该耐血DNA聚合酶的常规参数，同时可以考虑适当延长延伸时间。

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